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真菌基因组DNA提取试剂盒

原理简介真菌是具有真核和细胞壁的异养生物。种属很多，已报道的属达1万以上，种超过10万个。真菌通常又分为三类，即酵母菌、霉菌和蕈菌（大型真菌）。对于酵母菌和霉菌，可以用玻璃珠处理，而对于大型真菌，可直接用液液氮研磨。经过前期处理的菌液，再经过裂解液及蛋白酶处理后，玻璃奶吸附DNA，去掉其他杂质，，可得到高纯度的基因组。提取纯化后的DNA，可以直接用于 PCR/Real time-PCR，sequencing，Southern blot，mutant analysis，SNP 等下游应用实验。注意事项1．由于真菌种类万千，对于一些特别难处理的真菌，可用液氮研磨，再用玻璃珠振荡，蛋白酶K处理，一般都可以得到一定量的基因组DNA，如电泳检测很弱，一般PCR都会有较好结果。2．如果DNA提取量很少，可加长玻璃珠处理时间，如果提取DNA片段很短，成弥散条带，可减少玻璃珠处理时间。操作步骤1．样品的处理：1）对于酵母菌，取1-2ml培养好的菌液，离心收集，弃上清。加入300ul 裂解液，加入10ul RNase A，再加入100mg玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约5-10min。2）霉素（孢子也可相同处理）：取50-100mg菌丝，加300ul裂解液，用玻璃研磨器适当研磨分散菌丝，加入10ul RNase A，再加入100mg玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约30min。3）大型真菌（如蘑菇等）：称取50-100mg样品，倒入适量的液氮，立即研磨重复3 次，使样品研成粉末（如无液氮，可加300ul裂解液后用玻璃研磨器适当研磨），加300ul裂解液，加入10ul RNase A，再加入100mg玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约5min。2．加入10ul 10mg/ml的蛋白酶K，充分混匀，55℃水浴消化，15－30min。消化期间可颠倒离心管混匀数次。3．12000转离心2min。将上清转移到一个新的离心管中。如有沉淀，可再次离心。4．在上清中加入三倍体积无水乙醇，充分混匀。5．12000rpm离心5分钟，去上清，核酸在沉淀中。6．沉淀中加入500ul结合液，55℃水浴1-2分钟，核酸沉淀可溶解。6．玻璃奶摇匀。加入50ul摇匀的玻璃奶，混匀，室温放置2分钟，10000转/分钟离心1分钟，去上清；沉淀加入1ml 70%乙醇，振荡混匀，10000转/分钟离心1分钟，去上清，70%乙醇重复洗一次，再用无水乙醇洗一次。去上清，再次离心2分钟，用小吸头吸去上清。7．室温放置10分钟（如果玻璃奶加量，请适当延长放置时间，此步为去除残余酒精，以免影响下游实验），加入50－100ul TE缓冲液混匀溶解，55℃水浴5分钟。离心，取上清为所提基因组。8．电泳或者其他方法检测，进入下游实验。

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