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细菌基因组DNA提取试剂盒

原理简介本试剂盒适合于常规革兰氏阳性及阴性细菌基因组的提取。*的裂解缓冲液加上蛋白酶K等迅速去掉除DNA外的其他物质，并利用玻璃奶吸附DNA，进一步的去掉其他杂质，提取出来，得到的DNA可用于PCR/Real time-PCR，sequencing，Southern blot，mutant analysis，SNP等下游应用实验。

注意事项1．裂解液低温时可能出现析出和沉淀，可以在热水中温浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。2．避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。3．RNaseA经常使用可放2－8度保存，蛋白酶K请放－20度保存。4．同一样本，如果想大量提取，可以增加样本量，并且每一步试剂加量，但使用次数会成倍减少。

操作步骤1．取100－300ul培养的细菌（如果细菌浓度很高，请减少细胞用量），12,000rpm，离心2分钟，尽可能的吸净上清。如果细菌为革兰氏阳性菌，请用溶菌酶处理，处理方法：称取100mg溶菌酶，加入1ml双蒸水，溶解后，分装成100ul/支，冻存，用时取出一支，直接加入*步收集的菌液中，重悬菌液，37度处理半小时，离心，去上清。如果为阴性菌，可跳过此步。2． 加入250ul裂解液，立即震荡混匀，加入10μl RNase A（10mg/ml）溶液，振荡混匀，室温放置5-10分钟。3．加入10μl蛋白酶K（10mg/ml）溶液，颠倒混匀，65℃水浴放置10－30分钟，期间颠倒3－5次，小心离心管盖受热开启。4．在上清中加入三倍体积无水乙醇，充分混匀。5．12000rpm离心5分钟，吸去上清，核酸在沉淀中。6．沉淀中加入500ul结合液，65℃水浴1-2分钟，核酸沉淀可溶解。6．玻璃奶摇匀。加入50ul摇匀的玻璃奶，混匀，室温放置2分钟，10000转/分钟离心1分钟，去上清；沉淀加入1ml 70%乙醇，振荡混匀，10000转/分钟离心1分钟，去上清，70%乙醇重复洗一次，再用无水乙醇洗一次。去上清，再次离心2分钟，用小吸头吸去上清。7．室温放置10分钟（如果玻璃奶加量，请适当延长放置时间，此步为去除残余酒精，以免影响下游实验），加入50－100ulTE缓冲液混匀溶解，65℃水浴5分钟。离心，取上清为所提基因组。8．电泳或者其他方法检测，进入下游实验。

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