细胞的冻存和复苏
一、细胞冻存液原理
在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂，可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在－130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。
细胞复苏时速度要快，使之迅速通过细胞zui易受损的－5～0℃，细胞仍能生长，活力受损不大。
目前常用的保护剂为二甲亚砜（DMSO）和甘油，它们对细胞无毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细胞。
二、细胞冻存液操作步骤
（一）冻存1、消化细胞（同实验二），将细胞悬液收集至离心管中。2、1000rpm离心10分钟，弃上清液。3、沉淀加，轻轻吹打均匀，计数，调整至5×106/ml左右。4、将悬液分至冻存管中，每管1 ml。5、将冻存管口封严。如用安瓿瓶则火焰封口，封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。6、贴上标签，写明细胞种类，冻存日期。冻存管外拴一金属重物和一细绳。7、按下列顺序降温：室温→4℃（20分钟〕→冰箱冷冻室（30分钟）→低温冰箱（－30℃ 1小时）→气态氮（30分钟）→液氮。注意：操作时应小心，以免液氮冻伤。液氮定期检查，随时补充，不能挥发干净，一般30立升的液氮能用1～1.5月。
（二）复苏1、准备一个茶缸或1000ml的烧坏，内装2/3杯37℃的温水。2、从液氮中取出冻存管、迅速置于温水中并不断搅动。使冻存管中的冻存物在1分钟之内融化。3、打开冻存管，将细胞悬液吸到离心管中。4、1000rpm离心10分钟，弃去上清液。5、沉淀加10ml培养液，吹打均匀，再离心10分钟，弃上清液。6、加适当培养基后将细胞转移至培养瓶中，37℃培养，第二天观察生长情况。
三、试剂和器材器材：液氮罐、冻存管（塑料螺口冻存管或安瓿瓶）、离心管、吸管、离心机等试剂：0.25％胰酶、培养基、含保护剂的培养基（即冻存液）
C0050 品牌SGGGO QQ：1749072012 100ml 360.00
此主要是由血清和DMSO组成，适合于大多数细胞的冻存，其冻存方法与常规方法相同。
C0170 | 10×PBS，PH7.2-7.4，10倍浓缩液，液体 | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 500ml | 100.00 |
C0260 | 1M Hepes溶液（细胞培养） | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 125ml | 236.00 |
C0140 | D-Hanks（HBSS）不含钙镁，不含酚红 | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 500ml | 100.00 |
C0130 | D-Hanks（HBSS）不含钙镁，含酚红 | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 500ml | 100.00 |
C0100 | D-PBS（DPBS） | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 500ml | 80.00 |
C0120 | Hanks（HBSS）含钙镁，不含酚红 | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 500ml | 100.00 |
C0110 | Hanks（HBSS）含钙镁，含酚红 | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 500ml | 100.00 |
C0190 | L-谷氨酰氨溶液（L-Glutamine，Liquid）（200mM） | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 125ml | 80.00 |
C0160 | PBS缓冲液（液体）PH7.2-7.4 | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 500ml | 80.00 |
C0200 | 丙酮酸钠溶液（Sodium Pyruvate）100mM | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 125ml | 100.00 |
C0250 | 非必需氨基酸溶液（100×） | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 125ml | 140.00 |
C0240 | 青链霉素混合液（100×） | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 125ml | 80.00 |
C0050 | | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 100ml | 360.00 |
C0210 | 胰蛋白酶－EDTA消化液（0.25%）不含酚红 | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 125ml | 90.00 |
P0220 | 胰蛋白酶－EDTA消化液（0.25%）含酚红 | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 125ml | 90.00 |
C0230 | 胰蛋白酶消化液（0.25%）不含酚红 | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 125ml | 90.00 |
N0080 | 2×HEPES缓冲盐溶液 | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 100ml | 100.00 |
©
金山科研平台是专业的授权总代理区域代理经销平台。
© 如需询价，请加客服QQ：1749072012 、客服微信：jinshanbio，或发送邮件到1749072012@qq.com
© 平台为生命科学研究相关领域提供一站式耗材试剂仪器解决方案和采购服务，数据资源基于CC协议。
© 本文地址：
https://www.16ao.com/thread-15246.htm
特别声明：以上内容(如有图片亦包括在内)来源于授权厂家或网络，如有侵权，请联系删除，本平台不提供信息存储服务。
Notice: The content above (including the pictures if any)comes from authorized manufacturers or networks. In case of infringement, please contact to delete it. This platform does not provide information storage services.
QQ:1749072012