超滤是大分子脱盐、浓缩最方便的方法,重复性好,得率有保障,已经在蛋白、抗体、病毒、核酸、囊泡等样品制备中建立标准操作;在目前大热的外泌体制备中也已经成为主流方法。Millipore的Amicon® Ultra超滤管采用离心方式快速处理样品,是很多科研小伙伴们每天要用到的基本装备。
内管体积
Merk MILLIPORE超滤管内管分为0.5ml,4ml,15ml,三种体积。
分子量
有3kd,10kd,30kd,50kd,100kd 五种分子量。
用途
MILLIPORE超滤管,可用于生物样品纯化,蛋白质浓缩,脱盐和缓冲液更换,垂直结构的膜减少了浓差极化,快速离心并可直接吸取回收样本,浓缩倍数高达80-100倍,是样本处理的得力助手。
如何选对截留分子量?
Millipore的超滤管采用其特有的再生纤维素膜,定义为:一个确定NMWL 的超滤膜应该截留至少90% 以上的这个大小的球形分子,即100kDa的球形蛋白用100k的Ultracel®再生纤维素膜得率超过90%。
1、样品分子形状为球形
超滤管选择第一原则:膜孔径要小于目的分子。如果分子有近似球形的立体结构(而非明显的线性分子),在Millipore再生纤维素超滤膜体系内,选择“等于”或“略小于”目的分子的截留分子量的超滤管是最佳选择,这样操作起来又快又好,既保证了样品回收率,又缩短了离心时间,大幅降低大分子损伤风险。
2、没有参考的样品
因为样品分子形状不同,为了最大化样品的回收,对于没有参考的样品,可以初步选择截留分子量约为目的分子分子量1/2的超滤管。
(以0.5mL的AU0.5为例,其它型号截留分子量的选择原则一致,具体离心力和离心时间不同。)
如何最大化回收率?
反转离心回收,可获得最高得率。
① 反转离心回收设计使蛋白样品,特别是小体积样品高效回收,避免枪头吸取造成的样品丢失或操作错误;
② 0.5mL、2mL 和 70mL 超滤管设计为反转回收模式。
超滤管能否脱盐浓缩?
浓缩用超滤管,脱盐用透析袋或脱盐柱,这是很多实验室一直沿用的实验操作。其实呢,超滤管做“脱盐+浓缩”,也是很多蛋白操作高手的小诀窍。利用millipore超滤管进行脱盐浓缩,可以用更少的工具和更短的时间,减少转移误操作和样品损失,获得更好脱盐浓缩效果。
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