PAX Blood miRNA Kit (For PAXgene Blood RNA Tube)

PAX Blood microRNA Kit 核酸提取

目录号：91511

产品简介

PAX Blood miRNA Kit设计用于从储存在保存试剂和PAXgene®中的血液样品中分离总RNA>18个核苷酸（包括miRNA）;血液 RNA 管。该程序可wan全去除污染物和酶抑制剂，从而产生高质量的 RNA。使用 PAX Blood miRNA 试剂盒纯化的 RNA 可直接用于 RT-PCR 等应用。

从保存试剂中取出样品。对于储存在 PAXgene 中的血液样本®血液 RNA 管，通过离心收集细胞。样品在含有蛋白酶 K 的优化缓冲液下洗涤和裂解。将样品离心以去除细胞碎片和其他颗粒。用异丙醇调整结合条件后，将样品上样到 RNA 结合柱上。通过短暂的离心或真空步骤，样品通过结合 RNA/miRNA 的柱基质。经过三个洗涤步骤后，用不含 RNase 的水洗脱纯化的 RNA/miRNA。

产品特点

配套PAXgene采血/RNA保存管提取血液microRNA

Kit Contents and Storage

注意：蛋白酶 K 是一种冻干物。离心几秒钟，然后用 1 ml 蒸馏水等分溶液复溶。在 –20 °C 下储存。 避免反复冻融。所有试剂在指ding温度下储存时，可稳定保存 9 个月。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

描述PAX Blood miRNA Kit设计用于从储存在保存试剂和PAXgene® Blood RNA Tube中的血液样本中分离总RNA>18个核苷酸（包括miRNA）。该程序可wan全去除污染物和酶抑制剂，从而产生高质量的 RNA。使用 PAX Blood miRNA 试剂盒纯化的 RNA 可直接用于 RT-PCR 等应用。

从保存试剂中取出样品。对于储存在 PAXgene® Blood RNA Tubes 中的血液样本，通过离心收集细胞。样品在含有蛋白酶 K 的优化缓冲液下洗涤和裂解。将样品离心以去除细胞碎片和其他颗粒。用异丙醇调整结合条件后，将样品上样到 RNA 结合柱上。通过短暂的离心或真空步骤，样品通过结合 RNA/miRNA 的柱基质。经过三个洗涤步骤后，用不含 RNase 的水洗脱纯化的 RNA/miRNA。

用户提供的材料和设备：

1. 微量离心机的离心能力为 13,000 x g

2. 100% 异丙醇

3. 不含 RNase 的过滤移液器吸头

4. 不含 RNase 的水

5. 1.5 或 2.0 ml 微量离心管

6. 摇动培养箱或加热块，温度可达 55°C、65°C

7. 带水平转子的离心机，离心力可达 5,500 x g

注意： shou次使用前，将规定量的乙醇加入洗涤液中

溶液 1 和洗涤溶液 2/3 瓶，充分混合，并用勾号标记瓶子。

将培养箱或加热块加热至 55°C。

1. 使用水平转子以 3,000-5,000 x g 的离心力离心 PAXgene® Blood RNA 管 10 分钟。

2. 吸出并丢弃上清液。 3. 加入 4 mL 不含 RNase 的水。涡旋以wan全重悬沉淀。 4. 使用水平转子以 3,000-5,000 x g 的离心力离心 PAXgene® Blood RNA Tube 10 分钟。 5. 吸出并丢弃上清液。

注意：不wan全去除上清液会降低裂解效率并稀释裂解物，从而降低 RNA 产量。

6. 加入 350 μl 重悬缓冲液。涡旋以wan全重悬沉淀。 7. 将样品转移到新的 1.5 ml 微量离心管中。 8. 加入 300 μL 结合缓冲液和 20 μL 蛋白酶 K 溶液。涡旋 5 秒钟以充分混合。

9. 使用振荡培养箱在 55°C 下孵育 10 分钟。 10. 可选：将裂解物通过安装在注射器上的 20 号针头（直径 0.9 mm）至少 5 次，或使用电子组织匀浆器匀浆。此步骤剪切基因组 DNA，降低裂解物的粘度，并提高产量。

11. 将匀浆以 13,000 rpm 离心 3 min。将上清液转移到新的离心管中。 12. 加入等体积的 100% 异丙醇。涡旋充分混合。 13. 将最多 700 μl 混合物转移至 2 ml 收集管（提供）中的 RNA 结合柱中。

14. 以最大速度离心 1 分钟。 15. 吸出并丢弃滤液，重复使用收集管。 16.重复步骤 13-15，直到剩余样品转移到 RNA 结合柱中。

17. 加入 350 μl 洗涤液 1. 18. 以最大速度离心 1 分钟。 19. 吸出并丢弃滤液，重复使用收集管。 20. 对于每个 RNA 结合柱，准备 DNase I 消化反应混合物如下：

重要说明： • DNase I 非常敏感，容易发生物理变性。不要涡旋 DNase I 混合物。倒置试管轻轻混匀。 • 在 RNA 分离之前新鲜制备 DNase I 储备液。 • 标准 DNase 缓冲液与膜上 DNase I 消化不兼容。使用其他缓冲液可能会影响 RNA 与基质的结合，并可能降低 RNA 产量和纯度。

• 所有步骤必须在室温下进行。快速但小心地工作。

21. 将 50 μl DNase I 消化反应混合物直接移液到 RNA 结合柱的中心表面。

注意：确保将 DNase I 消化混合物直接移液到膜上。如果一些混合物保留在 RNA 结合柱的壁或 O 形圈上，则 DNase I 消化将不wan全

22. 在室温下静置 15 分钟。 23. 加入 350 μl 洗涤液 1.以最大速度离心 1 分钟。 24. 吸出并丢弃滤液，重复使用收集管。 25. 加入 500 μl 洗涤液 2/3。以最大速度离心 1 分钟。 26. 吸出并丢弃滤液，重复使用收集管。 27. 重复步骤 25-26 进行第二个洗涤液 2/3 洗涤步骤。

28. 以最大速度离心空的 RNA 结合柱 2 分钟，以干燥柱基质。

注意：洗脱前干燥柱膜很重要。残留的乙醇可能会干扰下游应用。

29. 将 RNA 结合柱转移到 1.5 mL 微量离心管中。 30. 将 50-70 μl 不含 RNase 的水直接加入到膜中心（可选：将水预热至 70–90°C 将增加 RNA 产量）。在室温下静置 1 分钟。 31. 以最大速度离心 2 分钟。

PAX Blood microRNA Kit 核酸提取