多糖多酚植物总 RNA 提取试剂盒（gDNA 过滤器）

Polysaccharide/polyphenol Plant Total RNA Mini Kit

多糖多酚植物总RNA快速提取试剂盒核酸提取

目录号：91318

产品内容

自备试剂

无水乙醇

保存条件

室温（15 ~ 25℃）下，存放 12 个月，不影响使用效果。

产品简介

适用于快速提取各种植物根、茎、叶、花的总RNA，采用gDNA过滤器，高效滤除gDNA，得到的总RNA可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通转录组测序、RACE等。

成功案例：棉花、海棠、黑加仑、烟草、拟南芥、虎杖、大豆、草莓、冬青、月季花雌蕊、蔷薇、沙棘、冬枣、芦荟、仙人掌、报春花、水稻、玉米、唐菖蒲、樱桃、白玉兰、毛白杨、樱花、葡萄、百合花、百合叶子雌蕊雄蕊、紫菜、绿藻、香蕉、水仙花、青花菜、地被菊、苹果、梅花、番茄、石斛、毛桃、苎麻、慈姑、葛根、甘肃桃、玫瑰花、槟榔果、甜糖菊、硅藻、牡丹、胡杨、油桐果、梨子皮、板栗花序、青皮云杉、红树根、铁线蕨、黄瓜、小麦、番木瓜、甘薯、紫薯、油松、油茶、马尾松、芜菁、毛果杨、木薯、大叶落地生根、山杏、旱柳、桉树、琵琶花果、麻风树，沙生槐、荞麦...

产品特点

1. 无毒：免氯仿、免β-巯基乙醇！

2. 高质：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

3. 高效：提取全过程仅需 20min！

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

操作步骤

第一次使用前请先在漂洗液 RW 中加入指ding量无水乙醇，详见瓶身的标签。

提示：所有离心步骤必须在室温（15 ~37℃）下进行。

1. 材料处理：

a．吸取500μl裂解液PRL，转入 1.5 ml 离心管中，再加入50 μl糖酚去除剂PAD，混匀备用。

注意：糖酚去除剂PAD是提取多糖、多酚、次级代谢产物多、色素含量丰富的困难样品bu可或缺的成分。对于幼嫩的农作物叶片等简单样本，不加糖酚去除剂PAD，RNA的产量可能会提高一些。

b．液氮中研磨植物组织成细粉，取≤50mg细粉转入上述装有PRL裂解液的离心管中, 剧烈涡旋震荡30sec，充分混匀。

冬天气温低，37℃摇床放置3min，可增强裂解效果，提高产量

c．将裂解物 13,000 rpm 离心 5 ~10 min，沉淀不能裂解的碎片。

注意：使用1ml裂解液PRL和100μl糖酚去除剂去裂解100mg样品，RNA产量会翻倍。

2. 小心吸取上清（一般 480 μl，注意不要吸到沉淀）转入一个新的 1.5 ml离心管，加入0.5倍体积（一般240μl）的无水乙醇, 吹打混匀。

3. 每次转移≤750μl上清混合液至gDNA过滤器中，13,000rpm离心2 min，倒弃滤液。此时，绝大部分gDNA被滤除，RNA和少量gDNA残留被吸附在膜上，重复此过程，直到混合液全部转入gDNA过滤器。

4. 取出步骤3的gDNA过滤器，放入一个新的2ml离心管中，加入500μl裂解液PRL Plus，13,000rpm离心1min，收集滤液（RNA在滤液中），向滤液中加入250μl无水乙醇，吹打混匀。

5. 将滤液混合物加入RNA吸附柱中，13,000rpm离心2 min，此时，RNA被吸附在膜上，倒弃滤液。

6. 加入700μl去蛋白液RW1，室温放置1min，13,000rpm离心30sec，倒弃滤液。

7. 加入500μl漂洗液RW，13,000rpm离心30sec，倒弃滤液。

8. 重复步骤 7。

9. 将RNA吸附柱放回空收集管中，13,000rpm离心2 min，除去膜上残留的乙醇。

10. 取出RNA吸附柱，放入RNase-free1.5ml离心管中，向RNA吸附膜的中央悬空滴加30~50μl的RNase-free H₂O，室温放置1min，13,000rpm离心 1min。

11. 提取的总RNA，可直接用于下游实验，或于-70℃保存，以免降解。

附录：

一、液氮研磨（自动研磨仪）:

a. 在2.0 ml液氮研磨管中放入3 mm钢珠3粒，放进≤50mg样本，投入液氮中预冷。把研磨模块也丢到液氮中预冷，直到没有气泡冒出视为预冷完毕。

b. 把预冷好的离心管插入研磨模块中，放进研磨仪，设置55个频率，震荡30~60sec。（以北京赫得京N9548为例）

c. 研磨完成后，马上加500μl裂解液PRL和50μl糖分去除剂PAD，剧烈涡旋30sec。

d. 将裂解物13,000rpm离心5~10min，沉淀不能裂解的碎片。

二、免液氮直接研磨（自动研磨仪）——适用于新鲜样本

a. 在2.0ml液氮研磨管中加入5mm钢珠1粒，加1ml裂解液PRL和100μl PAD，放进≤100mg样本，设置60个频率，震荡2min。

b. 将裂解物13,000rpm 离心5~10min，沉淀不能裂解的碎片。

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