【名称】：percol1细胞分离液

【货号】：17089101

【品牌】：GE

【保存条件】：RT

【货期】：现货

Percol1不连续密度梯度沉淀法分离纯化和淋巴母细胞

（一） 原理

Percol1是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低《<20mosm/kgH20)，粘度也很小，可形成高达1.3g/ml密度，采用预先形成的密度梯度时可在低离心力（200~1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。由于Percol1扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。此外，Perco11不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌，还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。

（二）操作方法及注意事项

1.不同浓度（密度）Perco11溶液的制备：先用9份Percol1与1份8.5%NaC1或1.5MPBS混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液(0.85% NaC1或0.15M PBS)稀释到所需浓度。Percol1浓度(%)705020604030比重g/ml1.0901.0771.0671.0561.0431.031

2.不连续密度梯度Percol1层的制备：先将试管壁用牛血清湿润，除去多余血清，这种预处理可使逐层叠加的Perco11液平稳沿管壁流下，使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置，有时相邻两层Percol1比重相差不大时，可将Percol1液放入注射器中，小针头斜面紧贴管壁，任其自然慢慢流下。

3.装样：样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异，一般加样体积不宜过大，细胞浓度也不可过高，否则会影响细胞的分离和回收。

4.离心：一般采用离心力为400g，时间20~25min。由于多层Percol1之间密度差别不大，因此离心机加速、降速时要慢，要平稳。

5.取样：当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时，可逐层去除Percol1液后收集界面部位的细胞；有时大部分细胞位于Percol1层中，则需要逐层收集。收获含有Perco11液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。