伯乐电极杯使用方法

2025-11-25

伯乐电极杯(以Bio-Rad 1mm电击杯为例)的使用方法主要包括以下步骤:

准备电极杯:

将1mm电击杯和杯盖从储存液中拿出,倒置于干净的吸水纸上5分钟,沥干水分。

正置5分钟,待乙醇挥发干净后立即插入冰中,压实冰面,使电极杯顶离冰面0.5cm,盖上杯盖,冰中静置5分钟充分降温。

准备电击感受态细胞和DNA:

取-80℃保存的电击感受态细胞插入冰中5分钟,待其融化。

加入目的DNA(质粒或连接产物),用手拨打EP管底轻轻混匀,避免产生气泡,然后立即插入冰中。

电击操作:

用200μl枪头(切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中,避免产生气泡,盖上杯盖。

启动电转仪,设置参数:C=25μF,PC=200Ω,V=1.8kV(或按所用电转仪推荐的参数操作)。

将电击杯快速放入电转槽中,电击完成后快速插入冰中。

复苏及后续实验:

2分钟后从冰中取出电击杯,放至室温。

加入不含抗生素的无菌培养基(室温),吹吸电击杯底部数次混匀后,转移到无菌的离心管中。

根据不同菌种的复苏条件进行复苏及后续实验。

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