EndoFree Plasmid Maxi Kit

彩色无内毒素质粒大提试剂盒

彩色无内毒素质粒大提试剂盒 核酸提取

目录号：31115-10

产品内容：

保存条件：

在室温(15~25℃)干燥条件下，可保存 12个月。

RNaseA，可常温运输，-20℃保存。

产品简介：

本试剂盒用于无内毒素质粒 DNA 的大量制备，柱上去除内毒素，操作简单。菌体经改良的碱裂解处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心柱硅胶膜吸附。通过去蛋白液和漂洗液的清洗可去除蛋白及其他杂质，最后得到高纯度的无内毒素质粒 DNA，所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、细胞转染等分子生物学实验。

小质粒（<10kb），拷贝数高，100ml菌液通常能提到 500-1500ug质粒；大质粒（>10kb），拷贝数低，200ml菌液通常能提到 200-600ug质粒。

产品特点：

1.du特工艺配方清除内毒素，内毒素含量极低（< 1EU/ugDNA），细胞转染效果ji佳。

2.得率高： 150– 300ml菌液可提出多达 500– 2000ug的纯净质粒；

重要提示：一、使用前检查 SolutionII和 SolutionN3是否出现沉淀，如有沉淀 37℃加热溶解后再用。二、shou次使用前，请先在 Buffer WB2中加入无水乙醇（详见瓶身标签），混匀，并做好标记。三、shou次使用请先将 RNaseA全部加到 SolutionI中，混匀，每次使用后置于 2~8℃保存。操作步骤：

1.柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 2.5 ml的Buffer BL，10,000 rpm离心 2 min，弃收集管中滤液，将吸附柱重新放回收集管中。

2.取 100~150ml（最多 200ml）过夜培养的菌液，室温 10,000rpm离心 2min，弃上清，收集菌体。

（注意： 如果菌液浓度高，收集 100ml的菌体即可,菌液浓度低，收集 150-200ml菌液。）

3.加入 10mlSolution I，重悬菌体沉淀，涡旋震荡至che底悬浮，呈现出均匀浑浊的棕红色。

（注意：如有未che底悬浮的菌块会影响裂解，导致提取的质粒浓度及纯度降低）

4.加入 10mlSolutionII，颠倒混匀使菌体wan全裂解，直到溶液变清亮、粘稠的紫红色。

（注意：不可 Votex 剧烈震荡，以免造成基因组 DNA 片段的污染，所用时间不要超过 5min，以免质粒受到破坏，如未wan全变得清亮，可能是菌体太多，可增加 Solution II的用量，在后续的操作中Solution N3的用量也要相应增加）

5.加入 10mlSolutionN3，立即温和颠倒混匀，可见红黄相间的絮状物产生，继续混匀直

到wan全变为黄色，静置 2min，然后室温 10,000rpm离心 10min，小心取上清至新管。

（注意：离心后在最上层可能会出现一层漂浮膜，注意不要倒入吸附柱）

6.加入 0.3倍滤液体积的异丙醇，上下颠倒混匀。分两次（每次不超过 10ml）转入吸附柱中（吸附柱放入收集管中），10,000rpm离心 1min，质粒被吸附在膜上，弃滤液，直到所有混合溶液通过此吸附柱。

7.向吸附柱中加入 5mlToxinOutBuffer，室温 10,000rpm离心 1min，弃滤液。

8.加入 10mlBufferWB2，室温 10,000rpm离心 1min，弃滤液。

（注意：BufferWB2为浓缩液，按要求加入无水乙醇，用后应立即盖紧瓶盖，以防酒精挥发）

9.加入 5mlBufferWB2，室温 10,000rpm离心 1min，弃滤液。

10.将吸附柱放进收集管，室温 10,000rpm离心 5min，甩干膜上残留乙醇。

11.将吸附柱置于一个新的 50ml离心管（自备）中，打开管盖，室温晾干 5min，以免残留乙醇影响下游应用。

12.加入 1~2ml的洗脱液BufferEB，室温放置 2min，12,000rpm离心 2min，离心管底溶液即质粒 DNA。

（注意：事先在 65~70℃水浴中预热洗脱缓冲液 EB，可增加洗脱效率；

如果需要较多量质粒，可将得到的质粒溶液重新加入吸附柱中，重复收集 3次，可获得最大洗脱率；如需使用去离子水洗脱，可用 NaOH调整其 pH值在 7.0 - 8.5之间。

彩色无内毒素质粒大提试剂盒 核酸提取